- CRISPR関連遺伝子編集によるヘルペスウイルスの不活化について議論する口頭発表
- 2 つのポスター プレゼンテーションでは、HSV-1 角膜炎の治療における EBT-104 の可能性を強調し、in vitro でのほぼ完全なウイルス排除と in vivo でのウイルス排出の大幅な減少を実証しています。
- 同社はまた、次世代 AAV ベクター技術に関するデータも発表します。
高い遺伝子編集活性と AAV 生産性を備えたオールインワン AAV-Cas ベクター構成
サンフランシスコ、2024 年 4 月 22 日 (グローブ ニュースワイヤー) — 重篤な潜在性ウイルス感染症を治療するための CRISPR ベースの治療法を開発する臨床段階のバイオテクノロジー企業である Excision BioTherapeutics, Inc. (「Excision」、「当社」) は本日、次のことを発表しました。同社は、単純ヘルペスウイルス-1型角膜炎プログラムであるEBT-104からの肯定的なデータと、次世代AAV送達ベクターの概要を米国遺伝子細胞治療学会（ASGCT）2024年年次総会で発表すると発表した。 2024年5月7日から11日までメリーランド州ボルチモアで開催。
単純ヘルペス角膜炎 (HSK) は、角膜における単純ヘルペス ウイルス 1 型 (HSV-1) の感染によって引き起こされ、世界中で失明の主な原因となっています。 現在の抗 HSV-1 療法はウイルスの DNA 複製を妨げますが、HSV-1 の貯蔵庫を排除したり、再発を予防したりすることはできません。 CRISPR/Cas を介した遺伝子編集は、潜在的な HSV-1 保有者を直接排除することで、病気の根本的な原因に対処できる可能性があります。
Excision の EBT-104 は、HSK の潜在的な治療法として開発されている CRISPR ベースの遺伝子治療です。 EBT-104 は、CRISPR/Cas 遺伝子編集システムを利用して、潜在的な HSV-1 ウイルスを不活化します。
「このプログラムは、当社の新しい遺伝子編集アプローチ、独自のウイルス学プラットフォーム、および当社の遺伝子工学の専門知識を組み合わせることにより、満たされていない医療ニーズの高い感染症に対する治癒的なCRISPRベースの治療法を開発するという当社の使命の一部です」とダニエル・ドーンブッシュ最高経営責任者は述べた。切除担当官。 「複数のプレゼンテーションは、HSV-1 ゲノム DNA とウイルス力価を効果的に除去する CRISPR/Cas ガイド RNA ペアを同定するための当社の包括的なプラットフォームを活用する上での当社の大きな進歩を反映しています。 試験管内で ウイルスの排出を減らします 生きている。 私たちは、今年の ASGCT 年次総会で EBT-104 プログラムからのこれらの肯定的なデータを発表できることを楽しみにしています。」
ドーンブッシュ氏はさらに、「さらに、高い遺伝子編集活性、高収量、純度、ベクターゲノムの完全性を備えた次世代のオールインワン CRISPR/Cas ベクター構成を紹介します。 これらの新しく操作されたベクターは大規模に製造でき、製造収率と活性が大幅に向上することが実証されています。」
プレゼンテーションの詳細は以下の通りです。
タイトル：単純ヘルペスウイルスに対するCRISPR/Cas9媒介遺伝子編集は、潜在性ウサギ角膜炎モデルにおけるウイルスの再活性化を減少させる
セッションタイプ：ポスター発表
セッションタイトル: 眼および聴覚疾患
抽象的な： 1633年
プレゼンター: ナディア・アムラニ、Excision BioTherapeutics
位置：展示ホール
日付時刻： 2024 年 5 月 10 日、午後 5 時 30 分から 7 時 (EST)
HSV-1 の再発性再活性化と HSK における角膜の感染は、角膜混濁、浮腫、角膜瘢痕化、血管新生を引き起こし、不可逆的な視力障害や失明につながる可能性があります。 現在、HSV-1 に対して利用可能なワクチンはなく、ヌクレオシドアナログ治療はウイルスの複製を阻害しますが、感染を排除することはできません。 HSV-1、ICP0、ICP27 の 2 つの重要な遺伝子を標的にし、デュアルカット法を使用することで、ウイルスゲノムに大きな欠失を誘導し、DNA 修復後のウイルスの逃走を防ぎました。 SaCas9 とペアの gRNA を発現するオールインワン AAV2 ベクターを備えた Vero 細胞では、ウイルス量と力価がほぼ排除されました。 生きている、 HSV-1 角膜炎の潜在性ウサギモデルで角膜瘢痕化を使用した我々のアプローチにより、治療を受けたウサギの目からのウイルス排出が 60% 以上顕著に減少しました。 SaCas9 およびペアの gRNA を発現する AAV9 ベクターをウサギに静脈内 (IV) 投与すると、HSV-1 再活性化後の 1 匹を除くすべてのウサギでウイルスの排出が検出されませんでした。 ＩＶ送達後の低ＡＡＶ用量（６Ｅ＋１２ＶＧ／ｋｇ）であっても、潜在的なＨＳＶ−１が存在する三叉神経節（ＴＧ）においてかなりのレベルのＡＡＶベクターゲノムが観察された。 さらに、対照群と比較して、治療したウサギのTGではHSV-1ウイルスDNAおよびLAT RNAが顕著に減少しており、潜在的なHSV-1リザーバーが効果的に標的化されていることを示している。
タイトル: HSV-1 角膜炎の治療法としての CRISPR/CasX 媒介遺伝子編集
セッションタイプ：ポスター発表
セッションタイトル: 遺伝子破壊と切除
抽象的な: 1188
贈り物r: Guoxiang Ruan、Excision BioTherapeutics
位置：展示ホール
日付時刻: 2024 年 5 月 9 日、午後 5 時 30 分から 7 時 (EST)
ハイスループットのレンチウイルス スクリーニング法を利用して、HSV-1 ウイルス ゲノムを破壊し、HSV-1 ウイルスを不活化できる効果的なガイド RNA ペアを同定しました。 特定の遺伝子を標的とする gRNA から形成された 440 個の CasX2 gRNA ペアで構成される LentiCasX2-2xgRNA ライブラリを作成しました。 このライブラリーに由来するレンチウイルス ベクターを、ICP27 および ICP0 コンセンサス配列を含む HSV-1 シグナル獲得ノックイン レポーター HEK 293FT 細胞株に導入しました。 ICP27-ICP0 の切除の成功は、ブラストサイジン薬剤の選択とそれに続く FACS 採取によって促進されました。 次に、対になった CasX2 gRNA を含む領域を PCR 増幅し、Nanopore ロングレンジ シークエンシングを使用して配列決定しました。 スクリーニングの上位 2 つの CasX2 gRNA ペアを、HSV-1 ウイルスに感染した Vero 細胞でテストしました。 HSV-1 ウイルスの急速な複製を遅らせるために、Vero 細胞を感染後 24 時間バラシクロビルで処理し、その後さらに 4 日間培養して HSV-1 を複製させました。 空のベクター対照と比較して、2 つの CasX2 gRNA ペアは HSV-1 ゲノム DNA とウイルス力価を 96% 以上減少させました。
タイトル： ペアガイド RNA を使用した CRISPR/Cas 遺伝子編集用の次世代オールインワン AAV ベクターを開発
切除プログラム: 次世代ベクター
セッションタイプ: ポスター発表
セッションタイトル: AAV ベクター – ウイルス学とベクター学
抽象的な： 966
プレゼンター： Wenwen Huo、Excision BioTherapeutics
位置：展示ホール
日付時刻： 2024 年 5 月 9 日、午後 5 時 30 分から 7 時 (EST)
この研究は、高い遺伝子編集活性と AAV 生産性を備えたオールインワン AAV-Cas ベクター構成の開発を実証します。 14 のデュアルガイド、オールインワン AAV-SaCas9 構成は、SaCas9 発現カセットと、ウイルスの長末端反復配列 (LTR) とHIV-1 の Gag 遺伝子。 AAV バックボーンを最小限に抑えるために、AAV プラスミドのバックボーンにヒト ベータ アクチン遺伝子由来のスタッファー配列を導入し、HIV-1 ノックイン レポーター細胞株に形質導入し、誘導される HIV-1 切除効率を調べるために AAV 粗ライセートを調製しました。対になった HIV-1 ガイド RNA によって。 7 つの最も効率的な AAV-SaCas9 プラスミドを、HIV-1 プラスミド pNL4-3 とともに Hela 細胞にさらに同時トランスフェクトしました。 これらの中で、2 つの構成が最も高い SaCas9 およびガイド RNA 発現レベルを示し、優れた HIV-1 切除効率をもたらしました。 1 つの上位 AAV9-SaCas9 構成 (4.7 kb の AAV ベクター サイズ) および 2 つの上位 AAV9-PlmCasX 構成 (両方とも 4.5 bp の AAV ベクター サイズ) でのバイオリアクター テストでは、AAV 収量と感染力価の 3 ～ 10 倍の増加が実証されました。第一世代の AAV コンストラクトと比較すると、90% を超える PacBio シーケンシングリードがベクターゲノムにマッピングされ、AAV プラスミドバックボーンのパッケージングが 1% 未満でした。 これらの発見は、デュアルガイドで最適化されたオールインワン AAV ベクターが、CRISPR/Cas 遺伝子編集治療の多用途送達プラットフォームとしての可能性を強調しています。
タイトル： HSV-1 ゲノムの CRISPR/CasX 媒介遺伝子編集用の高度に保存された特異的なガイド RNA の選択
セッションタイプ：口頭発表
セッションタイトル: オンターゲットおよびオフターゲットのメソッド開発
抽象的な：256
プレゼンター: メルテム・イシック、Excision BioTherapeutics
位置: ボールルーム 3
日付時刻: 2024 年 5 月 10 日、午後 2 時から午後 2 時 15 分 (EST)
HSV-1 ゲノムのサイズが大きい (約 152 kb) ことと、その遺伝的多様性 (ウイルス ゲノム間のヌクレオチド同一性の 1 ～ 4% の差異) は、ゲノミクスの理解に重大な課題をもたらします。 現在進行中の研究により新たな遺伝子型が明らかになり、治療用ゲノム編集のためのリードガイドを選択する際にHSV-1の遺伝的多様性を考慮することの重要性が強調されています。 この研究では、CRISPR/CasX 遺伝子編集システムを使用して、2 つの必須 HSV-1 遺伝子、ICP0 と ICP27 を共標的にすることにより、潜在性 HSV-1 ウイルスを不活化しました。 ガイド設計を実行するために、高度に保存されたガイド RNA を選択するためのヘルパーウイルス科 CDS データベースを構築しました。 ICP0 をターゲットとする 22 個の PlmCasX ガイド RNA と ICP27 をターゲットとする 20 個の PlmCasX ガイド RNA が、70% 以上の HSV-1 株で完全に配列一致することが見つかりました。 それらは、ICP0 および ICP27 のコンセンサス配列と完全に一致することも見つかりました。 これらの 42 個の PlmCasX ガイド RNA で形成された 440 個のガイド RNA ペアを組織培養で DNA 切除効率についてテストしました。 相同性依存性および相同性非依存性の方法を使用して、最も有効なガイド RNA ペアのオフターゲット編集の可能性を評価しました。 結果は、社内で開発されたバイオインフォマティクス パイプラインと標的アンプリコン シーケンスを使用して分析されました。 オフターゲット評価により、検出可能なオフターゲット編集活性を示さなかった、特異性の高い PlmCasX ガイド RNA がいくつか同定されました。
Excision BioTherapeutics, Inc.について
Excision BioTherapeutics, Inc. は、重篤なウイルス性潜在感染症の潜在的な治療法として CRISPR ベースの医薬品を開発しています。 同社独自の多重遺伝子編集プラットフォームは、ウイルス複製を阻止する能力を実証した新しい遺伝子編集アプローチと CRISPR テクノロジーを統合します。 Excision のパイプラインは、単純ヘルペス ウイルス (HSV-1 角膜炎)、B 型肝炎ウイルス (HBV)、ヒト免疫不全ウイルス 1 (HIV-1) など、十分なサービスを受けられていない大規模な市場をターゲットとしています。 Excision の基礎技術は、テンプル大学のカメル・カリリ博士とカリフォルニア大学バークレー校のジェニファー・ダウドナ博士の研究室で開発されました。 詳細については、www.excision.bio をご覧ください。
接触：
ジョン・フランシス
ライフサイエンスアドバイザー
917-355-2395
[email protected]
1713818812
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2024-04-22 20:32:48