世界

複数の状態にあるプライムエディター複合体のクライオ電子顕微鏡構造

プライム編集システムは、SpCas9タンパク質と逆転写酵素、プライム編集ガイドRNA（pegRNA）を組み合わせて、DNA二本鎖切断やDNAドナーテンプレートを必要とせずに、さまざまなゲノム編集をインストールします。プライムエディター複合体がpegRNA誘導逆転写を開始および終了する方法は、まだ十分に理解されていません。現在、 自然首藤らはクライオ電子顕微鏡（cryo-EM）を用いてプライムエディター複合体の空間構造を決定し、プライム編集の段階的なメカニズムについての知見を提供した。著者らは、プライマーエディタ複合体を組み立てた。 化膿連鎖球菌 Cas9 ニッカーゼ (nSpCas9) と改変モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素 (M-MLV RT) を pegRNA および標的 DNA とともに使用し、開始前、開始、伸長、および終結状態での構造を決定しました。異なる状態間の構造比較により、逆転写中、M-MLV RT は SpCas9 に対して同じ位置に留まり、合成 DNA を含む pegRNA のヘテロ二本鎖は SpCas9 の表面に沿って構築されることが明らかになりました。重要なことに、終結構造により、M-MLV RT は予想された部位を超えて逆転写を延長し、スキャフォールド配列の部分的な組み込みにより標的遺伝子座で望ましくない編集が生じる可能性があることが示されました。これらの望ましくない挿入を排除する戦略の開発は、プライム編集システムの治療への応用にとって重要です。ここで得られた構造に関する洞察は、改良されたプライムエディターの合理的なエンジニアリングを導く貴重なリソースを提供します。 #複数の状態にあるプライムエディター複合体のクライオ電子顕微鏡構造