導入
サハラ以南のアフリカなどのマラリア流行地域では、胎児が子宮内で感染した母親からのマラリア原虫生成物に曝露される可能性があります。胎児は子宮内攻撃に対して免疫学的に反応性が低いと長い間考えられてきたが、最近の研究ではその逆であることが示された。機能的な T 細胞と B 細胞は、妊娠 12 週目という早い時期にヒト胎児で確認されています。熱帯熱マラリア原虫 (Pf) への曝露に応答して、サイトカインと免疫グロブリンがそれぞれ臍帯血 T 細胞と B 細胞によって産生されることもわかっています。これらの反応が特異的であるかどうか、あるいは長期免疫記憶や高親和性抗体を産生する長寿命の形質細胞の生成につながる可能性があるかどうかは、よく知られていません。しかし、胚中心に位置する濾胞性ヘルパーT細胞は、B細胞が形質細胞と記憶B細胞に分化するのを助けます。したがって、成熟したリンパ濾胞を持たない胎児はこれらの細胞を産生することができません。最近、循環性 T 濾胞性ヘルパー細胞 (cTFH) とも呼ばれる CXCR5 陽性 (CXCR5+) CD4 T 細胞が、B 細胞の抗体産生を助けることが成人末梢血中で同定されました。これは、cTFH 細胞が子宮内でも産生され、出生前の抗体応答に関与しているかどうかという疑問を引き起こします。
これを念頭に置いて、我々は、臍帯血中にCXCR5+ CD4 T細胞が存在するかどうか、またそれらが子宮内曝露およびPf抗原に対する抗体反応に関連しているかどうかを決定することを目的とした調査研究を実施した。
メソッド
私たちの目的を達成するために、私たちはヤウンデ中央病院とンコルビッソン保健地区の出産時の妊婦とその新生児を対象とした横断研究を計画しました。 HIV 陽性の女性と帝王切開で出産した女性、または参加を拒否した女性は除外されました。血液は、RDT によって確認された活動性マラリアを患っているか、妊娠 22 週目以降のマラリア歴のある女性の臍帯および胎盤の絨毛間腔 (IVS) から分娩時に採取されました。血液塗抹標本顕微鏡検査とネステッドポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) がマラリアの診断と種の識別に使用されました。 MagPix Multiplex Analyte Platform (MAP) アッセイを使用して、それぞれ臍帯血血漿および臍帯血単核球 (CBMC) 培養上清中のマラリア抗原 AMA1、EBA175、MSP1 に対する IgM と IgG を定量しました。リアルタイム定量的 PCR を使用して、CBMC から単離された CD4+T 細胞における CXCR5 遺伝子発現を定量しました。データはGraphPad Prism 5.0を使用して分析されました。この研究はカメルーンの人間研究に関する国家倫理委員会によって承認され、我々は研究計画書をヤウンデ大学医学部および生物医科学部の倫理委員会に提出した。
結果：
合計 30 個の母体血と臍帯血 (CB) サンプルのペアと 6 個の対照の非妊娠成人末梢血サンプルを使用しました。女性の 20% は顕微鏡検査により胎盤マラリア陽性であり、IVS 血液および/または胎盤印象塗抹標本から寄生虫が検出されました。しかし、PCR 検査では女性の 40% が熱帯熱マラリア原虫陽性でした。 CB塗抹標本の顕微鏡検査では寄生虫は検出されなかったが、PCR検査では16.7%がマラリア陽性であった。抗マラリア IgM 検査で陽性を示した臍帯血血漿はありませんでしたが、CBMC 培養上清の 16.7% が 3 つのマラリア抗原すべてに対する抗マラリア IgG 検査で陽性を示しました。
CB サンプルの 66.7% で CD4 T 細胞の CXCR5 発現が検出され、そのうち 20% は発現が最も低い成人サンプルよりも高い CXCR5 発現レベルを有し、3.3% は全成人サンプルの発現中央値に匹敵する発現レベルを有していた。 CXCR5 相対遺伝子発現は、胎盤マラリアを患う母親から生まれた新生児で有意に高く (p=0.016)、培養 CBMC を 10μg/mL の MSP-1 抗原で処理すると、CB サンプルの 55% で CXCR5 遺伝子発現が増加しました (ペアの未処理 CBMC での発現と比較して)。 CB CD4 T 細胞における CXCR5 の発現は、CBMC 培養上清における抗マラリア IgG 力価と相関しませんでした。
結論と推奨事項
我々は次のように結論づけた：CXCR5+ CD4 T細胞は子宮内で産生され、臍帯血中で検出可能である。豊富なCXCR5発現臍帯血CD4 T細胞は胎盤マラリアと有意に関連していた。私たちの研究集団では、臍帯血におけるCXCR5発現と子宮内の抗マラリア抗体の間に直接的な関連性は見つかりませんでした。これらのことから、我々は以下のことを推奨します: PD-1、BCL6、ICOS、CD45RO などの TFH の補助的ではあるが補助的なマーカーを使用して、臍帯血中の循環 TFH をさらに評価し、特徴付けること。フローサイトメトリーなどの補完的な技術を利用して、臍帯血中のCXCR5+ CD4 T細胞を数えます。出生時の臍帯血CD4 T細胞におけるCXCR5の高発現が小児期のマラリアに対する免疫獲得に影響を与えるかどうかを調べる縦断的研究を実施する。
キーワード: CXCR5、子宮内曝露、抗体産生
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