Gタンパク質の生殖系列変異はT細胞におけるシグナル伝達のクロストークを特定する

謝辞

資金提供: この研究は、国立アレルギー感染症研究所 (NIAID) (HCS への 1ZIAAI001059、MJL への 1Z01AI000717、RNG への 1Z01AI000758、KMD への ZIAAI000939、TJ への 1ZIAAI001156、AFF への ZIAA1001247、および 1ZICAI001244)、国立ヒトゲノム研究所 (NHGRI) (CRF への 1ZIAHG200407)、国立心肺血液研究所 (NHLBI) (KNO への 1ZIAHL006200)、国立歯科・頭蓋顔面研究所 (NIDCR) (NM への 1ZIADE000732) の内部研究プログラムを通じて、米国保健福祉省 NIH によって支援されました。国立小児保健・人間発達研究所 (NICHD) (CAS 宛て 1ZIAHD008920)、国立関節炎・筋骨格・皮膚疾患研究所 (NIAMS) (HHK 宛て 1ZIAAR041219)、国立糖尿病・消化器・腎臓病研究所 (NIDDK) (DEA 宛て 1ZICDK062009) および一部 NIAID からの連邦資金によるバイオインフォマティクスおよび計算生物科学部門 (BCBB) サポート サービス契約 HHSN316201300006W/75N93022F00001 に基づき Guidehouse に、また国立がん研究所 (NCI) との契約番号 75N91019D00024 および HHSN261200800001E に基づき NIAID に提供。この研究では、メリーランド州ベセスダにある NIAID のゲノム研究統合システム (GRIS) と OCICB 高性能コンピューティング クラスターの高性能コンピューティング機能が利用されました。分子グラフィックスと分析は、カリフォルニア大学サンフランシスコ校のバイオコンピューティング、視覚化、情報科学リソースによって開発された UCSF Chimera で実行され、NIH P41-GM103311 の支援を受けました。HH は、大韓民国韓国生命工学研究院 (KRIBB) 研究イニシアチブ プログラム (韓国バイオメディカル サイエンティスト フェローシップ プログラム) の助成金によって支援されました。ITL は、ペンシルバニア大学免疫学大学院プログラムの医学科学者トレーニング プログラムの学生でした。また、カナダのケベック健康研究基金 (YAB に対して)、ZMNH の内部資金 (MK に対して)、日本学術振興会および持田記念医学薬学研究財団 (KM に対して) からも支援を受けました。フランスの大学病院HUGOネットワーク（Hôpitaux Universitaires du Grand Ouest）、フランス保健省、ポワトゥー＝シャラント、ブルターニュ、ペイ・ド・ラ・ロワール、サントル＝ヴァル・ド・ロワールの保健地方機関（HUGODIMS、2013、RC14_0107）（BI、S.Bé.宛）; スイス国立科学財団（プロジェクト番号320030_205097）（JPS宛）; フィンランド小児研究財団（MM宛）;ハワード・ヒューズ医学研究所、ロックフェラー大学、セント・ジャイルズ財団、NIH（R01AI127564）、国立先端トランスレーショナル・サイエンスセンター（NCATS）、NIH臨床・トランスレーショナル・サイエンス賞（CTSA）プログラム（UL1 TR001866）、フランス国立研究機関（ANR）の未来への投資プログラム（ANR-10-IAHU-01）、新興感染症の統合生物学研究所（ANR-10-LABX-62-IBEID）、LTh-MSMD-CMCD（ANR-18-CE93-0008-01）、フランス医学研究財団（FRM）（EQU201903007798）、スクエア財団、グランディール・ファンデーション・ソリダリテ・プール・ランス、SCORコーポレート・サイエンス財団、ジェネラル・アトランティックのウィリアム・E・フォード会長および最高経営責任者、ガブリエル・カイヨー、ジェネラル・アトランティックの共同社長、マネージングディレクター、EMEAおよびジェネラル・アトランティック財団の事業責任者、バタシー＆バワリー諮問グループ、フランス国立衛生医学研究所（INSERM）、パリシテ大学（APおよびJLC宛）、ウォレスファミリー研究基金（Ja.Ch.宛）、ケア・フォー・レア財団（C4R、160073）、エルゼ・クローネン・フレゼニウス財団（EKFS、2017_A110）、ドイツ連邦教育研究省（BMBF、01GM2206D）（FH宛）、ハーティ財団（P1230037、M.Wa.宛）国立保健医療研究会議（APP1081858 は EM、APP1113904 は RB、APP1108800 は CCG）、ビル アンド パトリシア リッチー財団（EM および CCG）、パデュー大学リチャード アンド アン ボルチ研究賞（VJW）、NIAID R01 AI120949 およびメイヨー クリニック財団（DDB）、USPHS 助成金 AI-139633 およびパーキン財団（RSG）、フィンランドのシグリッド ジュセリウス財団（OMM）、ゲノム医学教授職を通じた王立小児病院財団（Jo.Ch.）、ダニカ財団（TPS）、およびスイス国立科学財団助成金 31003A_175658（VLK）からの研究支援を受けた。マードック小児研究所で実施された研究は、ビクトリア州政府の運用インフラストラクチャ サポート プログラムによって支援された。P1 の WES は、メルク社によって現物支給で実施された。この研究は、フランスのゲノム医療 2025 計画によって生成されたデータへのアクセスによって部分的に可能になりました。この出版物の内容は、必ずしも保健福祉省の見解や方針を反映するものではなく、また、商標名、商用製品、または組織の言及は米国政府による承認を意味するものではありません。

著者の貢献: HHは活性G間の相互作用を特定した_あい2 およびRASA2は、変異GのTCR誘導応答を調べる実験を行った。_あい2– 形質導入T細胞、患者T細胞のTCR誘導シグナル伝達、形質導入T細胞、およびRASA2欠損T細胞; 検証済み グナイ2 変異アレル（P1）特異的KO、GSTプルダウン、共免疫沈降、GAPアッセイ、共焦点顕微鏡、FLIMイメージング、in vitro走化性、GTPaseアッセイを実施しました。HJはGを評価する実験を行いました。_あい2 cAMP ELISAまたはレポーターBRETアッセイによる変異体の検出、in vitroトランスウェル走化性、患者およびKO T細胞のTCR誘導応答性 [GNAI2 mutant allele (P1), RASA2, and ACs]、およびAC-KO T細胞のTCR誘導シグナル伝達。ITLは患者の病因を特定し、確立した。 グナイ2 変異; 走化性障害、Ca^2歳以上 フラックス、TCR誘導性過敏症、近位および下流シグナル伝達、in vitroトランスウェル走化性、ケモカイン誘導性Ca^2歳以上 フラックス、およびG_あい2 患者および変異体Gにおける発現_あい2形質導入T細胞。ITL、JNM、RNGは養子細胞移植を用いて生体内での走化性を研究した。MMKは患者T細胞のTCR誘導活性化およびシグナル伝達実験を実施した。AKとVLKはGTP結合およびGTP加水分解をG_αi 変異体と分析データ。YABとTPSは変異Gを評価するためのBRETアッセイを設定した。_あい2 P1からGの相互作用を調べる_あい2 およびGPCR。DEAは相互作用タンパク質を特定するために質量分析を行った。KMDはRGSタンパク質プルダウンを行った。MKとSRはGのcAMP測定を行った。_あい2 Gloセンサーを用いた変異体の解析。DBK、DLF、XX、WSK、TJはEZ-TAXIScan実験を実施した。KAZは白血球の水疱への遊走を評価した。NMMは口腔粘膜における細胞蓄積を評価した。HHKは皮膚ウイルス分析を実施した。PCは分子モデリングを実施した。MMK、JD、DTはG_あい2 発現、in vitro走化性、GTPaseアッセイ、および患者サンプルの処理。K.Me.は、外因性発現RASA2とG_あい2 変異体。MFRQは患者のT細胞のTCR誘導シグナル伝達実験を支援した。SGとJKは画像キャプチャと分析を支援した。EM-F、RB、CCGは、 グナイ2 KI マウス。VJW は AC3 および AC6 の二重 KO HEK293 細胞を生成し、cAMP アッセイについて助言しました。DDB は原稿作成のためのデータ分析を支援しました。実験的患者生体試料および臨床データは、PJM、HCS、JT、BI、AFF、ZZ-C.、CK、LF、PE、WA-H.、JPS、KV、PAT、VB、LP、MM、PL、KNO、AN、ML-N.、BM、OMM、FH、PS、M.Wo.、KES、M.Sl.、M.So.、HHK、S.Ba.、HS、RJ、DLによって収集/管理されました。遺伝子研究（WES、WGS、Ion Torrentパネル、およびSanger確認）は、YZ、SK、CS、RJT、NC、CK、FL、M.Wa.、RP、MM、AP、J.Cho.、GL、A.-LB、MT、PL、TB、JD、GT、YD、APH、JS、SL、M.Si.によって実施、分析、または調整されました。 J.-LC、OMM、J.Chr.、S.Bé.、RSG、CAS、HS、BK、BB-P.、PB、およびK.Mc。患者コホート全体で、異形症と骨格画像はCRFによって評価および分析され、神経学的画像はASによって分析され、組織病理学的分析はSPAFFによって実行され、ITLはHCSによる全体的な臨床データキュレーションを支援しました。AJOはHPOデータのカテゴリ分析を実施しました。JGは統計分析を支援しました。HFMは臨床試験プロトコルとサンプル収集を調整しました。HCSは実験作業とデータ分析を計画および監督しました。MJLは助言を提供し、実験作業の監督を支援しました。YZは、サンガーシーケンス変異確認、コホート全体のWES再分析、およびRNA-seq分析を含む遺伝子研究を実施、監督、および調整しました。HH、HJ、ITL、MJL、およびHCSが原稿を準備しました。すべての著者は提出された原稿を読み、議論しました。

競合する利益: HCS は Amgen と Eli Lilly の株式を保有しています。KM は遺伝子検査研究所 GeneDx の従業員です。RJT は Illumina の従業員であり株主です。JPS は過去 3 年間、SOBI と Pharming の leniolisib のデータ監視委員会のメンバーでした。CAS は Lundbeck Pharmaceuticals の有償コンサルタントでした。CAS は、NIH が保有する PRKAR1A と Carney 複合体に関する特許出願 US-20030022180-A1、NIH が保有する PDE11A と副腎疾患に関する特許出願 US-20090005337-A1、および NIH が保有する成長ホルモン障害の治療に関する特許出願 US-20170304405-A1 の発明者です。CAS と GT は、NIH が保有する GPR101 機能に関する特許出願 US-20190314459-A1 の発明者です。他の著者は、利益相反がないことを宣言します。