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2024-04-15 01:15:47
図S1。 電力依存性測定用の変復調システム。 DM1 は「二色性ミラー」、LIA は「ロックインアンプ」、PBS は「偏光ビームスプリッター」を表します。 要素の仕様は「材料と方法」に記載されています。
図S2。 多光子顕微鏡イメージングシステム。 DMは「ダイクロイックミラー」、Fは「フィルター」、Lは「レンズ」を表しています。 明確に説明するために、要素には番号が付けられ、その仕様は「材料と方法」に記載されています。
図S3。 (A) NIR-II 蛍光広視野顕微鏡イメージング システム。 要素の仕様は「材料と方法」に記載されています。
図S4。 NIR-II蛍光巨視イメージングシステム。 要素の仕様は「材料と方法」に記載されています。
図S5。 異なる生物学的構造の密度分析。 (A) 肝細胞、肝血管、脳血管の密度の統計分析。 (B) 肝細胞密度の統計解析用の生データ。 肝細胞はICGで標識され、二光子蛍光イメージングに供されました。 撮像深さはそれぞれ80、84、88μmでした。 使用した励起波長は 1800 nm、肝臓表面への入射パワーは 13 mW、走査速度は 2.4 μs/ピクセル、走査解像度は 1024 ピクセル × 1024 ピクセルでした。 PMT バイアス電圧は 650 V に設定されました。(C) 肝血管密度の統計解析のための生データ。 肝血管を QD で標識し、3 光子蛍光イメージングを行いました。 撮像深さはそれぞれ80、84、88μmでした。 使用した励起波長は 1800 nm、肝臓表面への入射パワーは 13 mW、走査速度は 2.4 μs/ピクセル、走査解像度は 1024 ピクセル × 1024 ピクセルでした。 PMT バイアス電圧は 850 V に設定されました。(D) 脳血管密度の統計解析のための生データ。 脳血管をQDで標識し、3光子蛍光イメージングを行った。 撮像深さはそれぞれ948、936、924μmでした。 使用した励起波長は 1700 nm、肝臓表面への入射パワーは 13 mW、走査速度は 3.6 μs/ピクセル、走査解像度は 512 ピクセル × 512 ピクセルでした。 PMT バイアス電圧は 850 V に設定されました。スケール バー: 50 μm。
図S6。 肝細胞のNIR-II蛍光顕微鏡画像。 使用した照明源は、793 nm の波長で発光する連続波レーザーで、肝臓表面に 2 mW/cm2 の光出力密度を供給しました。 1300 nm ロングパス フィルターを使用した NIR-II 蛍光検出。InGaAs FPA の積分時間は 100 ms に設定されました。 スケールバー: 50 μm。
図S7。 異なる中心波長励起下での代表的な画像の表示。 (a) 1300、1600、1700、および 1800 nm の励起波長を利用した、ICG 標識肝細胞の多光子蛍光イメージング。 撮像深さは６０μｍであった。 (b) 1300、1600、1700、および 1800 nm の励起波長を利用した量子ドット標識肝臓血管の多光子蛍光イメージング。 撮像深さは９６μｍであった。 肝臓に対する 1300 nm レーザーの出力は 2 mW、走査速度は 1.6 μs/ピクセル、PMT バイアス電圧は 500 V でした。肝臓に対する 1600 nm レーザーの出力は 8 mW、走査速度は肝臓サンプルに対する 1700 nm レーザーの出力は 10 mW、走査速度は 2.2 μs/ピクセル、PMT バイアス電圧は 500 V でした。肝臓サンプル上の 1800 nm レーザーは 13 mW、走査速度は 2.4 μs/ピクセル、PMT バイアス電圧は 650 V でした。スケール バー: 50 μm。
図S8。 (A) 1600 nm および (B) 1700 nm フェムト秒レーザー励起下での ICG のパワー依存性。
図S9。 図 2G–I の一連の画像の同じ二核肝細胞 (白線で示す) に沿った強度プロファイル。 生データは点線で示され、実線はガウス フィッティングを表します。 図中のピークに隣接する数値は、フィッティング プロセスの結果として得られる半値全幅 (FWHM) を示します。 この結果は、1800 nm 励起を使用したイメージングが肝細胞の識別においてより高い精度を提供することを示しています。
図S10。 (A) CSQD の高解像度透過電子顕微鏡観察。 (B) 動的光散乱 (DLS) の結果は、ポリエチレン グリコール (PEG) による CSQD の表面修飾の前後で得られました。 (C) ゼータ電位の結果は、PEG による CSQD の表面修飾の前後で得られました。
図S11。 (A) 1600 nm (B) 1700 nm、および (C) 1800 nm フェムト秒レーザー励起下での CSQD のパワー依存性。
図S12。 図 3D の一連の画像の同じ肝血管 (白線で示す) に沿った蛍光強度プロファイル (励起波長は 1600 nm および 1700 nm)。 生データは点線で示され、実線はガウス フィッティングを表します。 1800 nm 励起下での一貫した一連の画像のデータ分析を図 3G に示します。 3 番目の血管のガウス フィッティングから導出された SBR 値と FWHM 値が各図に示されています。 この発見は、1800 nm 励起によるイメージングにより肝血管の描写精度が向上することを示唆しています。
図S13。 APAP 溶液またはリン酸緩衝液の腹腔内注射から 24 時間後、(A) アラニン アミノトランスフェラーゼ (ALT) レベルおよび (B) アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ (AST) レベルをマウスの実験群と対照群の両方で評価しました。 各グループは、n = 4 匹のマウスで構成されました。 統計的有意性は *****p < 0.0001 として示されます。 (C) 急性肝不全マウスと (D) 対照群のマウスのヘマトキシリン・エオシン染色切片を検査すると、顕著な違いが明らかになります。 急性肝不全を患ったマウスの場合、肝細胞が中心静脈領域の周囲に集中していることが観察されます。 急性肝不全に罹患したマウスは、肝髄構造に明らかな障害を示し、肝細胞が中心静脈領域から周囲領域まで広がる局所的な円形凝固様壊死パターンを形成することを特徴としていました。 スケールバー: 100 μm。
図S14。 APAP 溶液注射 24 時間後の 3 匹のマウスの肝細胞と肝血管の多光子蛍光画像。 マウス 1 の画像は 160 μm の撮像深度で取得され、マウス 2 の画像は 220 μm の撮像深度で取得され、マウス 3 の画像は 20 μm の撮像深度で取得されました。 イメージング条件は、図 4D の 1800 nm 励起に対して確立された条件と一致します。 スケールバー: 50 μm。
図S15。 APAP誘発性急性肝不全マウスと対照群マウスの両方のNIR-IIマクロ画像を、異なる時点で撮影した。 肝臓領域は赤い矢印で示され、小腸領域は黄色の矢印で示されます。 撮像条件は図 4E の画像と一致します。 スケールバー: 10 mm。
#多光子蛍光顕微鏡を用いた高散乱および高密度標識肝組織の生体内観察 #Chen #Journal #Biophotonics