ウイルス | 無料全文 | ミノサイクリンの抗ウイルス効果の解明: インフルエンザウイルス感染時のウイルスリボ核タンパク質の核外輸送の調節

ミノサイクリンの細胞毒性を評価するために、ミノサイクリン（構造は 図1A) MDCK細胞の生存率に対する影響をMTTアッセイを用いて72時間にわたって評価した。DMSO処理した対照細胞と比較して、30.72 µMミノサイクリン処理で50%の細胞死（CC50）が観察された（図1B) であり、この薬剤の細胞毒性効果が比較的低いことを示している。続いて、非毒性用量でのミノサイクリンの抗ウイルス能を、IAV/PR8 に感染した MDCK 細胞で評価した。ウイルス感染 MDCK 細胞を、ミノサイクリン濃度 (0.1 nM ～ 1 µM) を徐々に増加させて 72 時間処理し、細胞上清を用いてプラークアッセイでウイルス収量を定量化した。非毒性用量のミノサイクリンの 208.4 nM で、ウイルス力価 (IC50) が 50% 減少したことが観察された。これにより、IAV 感染に対するミノサイクリンの選択性指数 (SI = CC50/IC50) が 147.4 と高いことが確認された (図1C) CC50/IC50データに基づき、ミノサイクリン500 nM用量がさらなる実験で使用された。この用量では、細胞毒性が無視できる程度でIAV産生に対する50%以上の阻害効果が観察されたためである。ミノサイクリン処理によって影響を受けるウイルスライフサイクルの段階を識別するために、感染細胞は前処理（感染の1時間前）、同時処理（感染中）、または後処理（ウイルス除去時）のいずれかで処理された。結果は、感染細胞をミノサイクリンで後処理すると最大の抗ウイルス効果を示したが、前処理と同時処理はウイルス産生とウイルス転写産物合成に有意な影響を与えなかったことを明らかにした（図1D) は、ミノサイクリンがウイルスの吸着や侵入に影響を与えないことを示しています。ウイルスのライフサイクルのさまざまな段階に対する効果を確認するために、添加時期の研究が行われました。ミノサイクリンを 0 hpi、6 hpi、12 hpi に投与し、24 hpi で細胞溶解を行ったところ、6 hpi または 12 hpi で薬剤を添加した場合、ミノサイクリンがかなりの抗ウイルス活性を示したことがわかりました。これは、ミノサイクリンがライフサイクルの最後の段階でウイルスの複製を調節することを示唆しています (図1E) ミノサイクリンの抗IAV活性をさらに解明するために、ミノサイクリン処理後のウイルス転写産物合成およびウイルス産生の経時的変化を評価した。予想通り、IAV/PR8感染MDCK細胞を500nMのミノサイクリンで処理すると、感染後24、48、72時間でHA力価が50%以上減少し、感染後12、24、48、72時間でウイルス(M1)mRNA転写産物合成が50%以上減少した(図1F,G) 同様に、ミノサイクリン存在下でのウイルス力価(PFU/mL)の減少がプラークアッセイによって確認された(補足資料図S4A細胞株特異的な影響を排除するために、ミノサイクリンの抗ウイルス活性はIAV/PR8に感染したA549細胞でも確認された（補足資料図S2E）。IAV/PR8に感染したMDCK細胞を100μMのリバビリンで処理したものが陽性対照として機能した。転写産物の合成と一致して、細胞培養適応株IAV/PR8またはパンデミックH1N1ウイルス株IAV/CAL（補足資料図S1A、B）。ミノサイクリン処理後のIAV/CALまたはIAV/H3N2に感染した細胞でもHA力価の減少が観察された（補足資料図S1C、D) これらの知見は、総合的に見て、ミノサイクリンの in vitro での抗インフルエンザ活性を強調するものである。
#ウイルス #無料全文 #ミノサイクリンの抗ウイルス効果の解明 #インフルエンザウイルス感染時のウイルスリボ核タンパク質の核外輸送の調節