蚊の飼育
A.ステファンシ これらの実験で使用されたListon（インド株）は、アイダホ大学で維持され、1998年にWalter Reed Army Institute of Research（Wrair; Washington、DC、USA）の昆虫学部から取得した卵に由来しました。すべての蚊のライフステージは、28°C、80％の湿度、および12時間の軽いダークサイクル（08:00時間でライトオン、20：00時間にライトオフ）で維持されました。コロニーの維持のために、蚊をケタミン（50 mg/kg）とキシラジン（5 mg/kg）で鎮静したCD-1マウス（Envigo、セントルイス、ミズーリ州）に与えました。アイダホ大学で実施されたマウスプロトコルは、連邦規制ガイドラインおよび基準（2023年3月27日に承認されたアイダホ州IACUC-2023-08プロトコル）に従って、施設内動物管理使用委員会によって承認されました。特に明記しない限り、成体蚊は10％スクロースに染まった綿球（1日おきに交換）で自由に維持され、メッシュスクリーニングをトッピングした2-Lポリプロピレン容器に収容されました。実験的蚊によって生成された卵を、500 mLの水で5-Lナルゲン鍋に洗浄しました。幼虫には、2％の血清ミクロンフライ食品とアクティブドライパン酵母の溶液が3日間2：1の比率で提供され、その後、プリナゲームフィッシュチョウペレットを飼育するまで供給されました。
水によるパン補給
いくつかの実験では、血液摂食の前に砂糖キューブと一緒に水に浸した綿球を介して蚊に鍋を提供しました（図1A）。対照群および治療グループの場合、80〜120の成体雌蚊（F0）を、メッシュスクリーニングをトッピングした2-Lポリプロピレンカートンに収容しました。これらの女性（F1）からの子孫とその後の世代（F2）がさらなる研究で使用されました。綿のパッドは、午前8時から10時から10時まで、夕方に1回は16:00から18:00時間の間に1日2回、1回、夕方に1回変更されました。対照群にろ過された水が供給され、治療グループは0.05、0.5、5、または50 g/L D-パントテン酸ヘミカルシウム塩を補充したろ過水を受け取りました（Sigma-Aldrich、Saint Louis、MO、USA）。これらの濃度は、蚊が蜜摂取を通じて遭遇する可能性のあるものを上回り、高度に上昇したPANレベルの影響を評価できるようにします。これらの投与量は、他の無脊椎動物との研究で提供された広範なPAN濃度も含まれます [21, 25]。蚊は、2つのgon栄養サイクル（GC1およびGC2）を完了することを許可されました。新鮮なパン処理は、各プロビジョニング期間の1日前に準備され、4°Cで保存されました。蚊は、補充されていない人工血液食を受け取る前に、3日間補充された水にアクセスできました。 F1雌のサブセットは、母親と同じパン治療を受け、「補足」と呼ばれました。 F1雌の別のサブセットは補足を受けず、「補充されていない」と呼ばれていました（図1B）。各生物学的複製は、の個別のコホートを使用しました A.ステファンシ。
図1
女性に対するパン補給の影響を評価するための実験的設計 A.ステファンシ 複数の世代にわたって。 （a）成体の雌には、補充された水を添加した後、それに続いて補充されていない血液または汎補充された血液が供給されました。血液摂食後、非授与された雌を除去し、産卵を監視しました。女性あたりの卵を記録し、幼虫を大人に飼育しました。その後、子孫は汎補充された補充されていないグループに分割されました（b）、およびプロトコル（a）その後の世代のために繰り返されました
人工血液食事の配達
浸した綿の球と砂糖キューブは、血液摂食の45分前に除去されました。蚊には、洗浄されたヒト赤血球（RBC）と熱不活性化ヒト血清（Grifols Bio Supplies、Inc.、ロサンゼルス、カリフォルニア州、米国）の1：1 vol/vol比で構成される血液食事が30分間提供されました。血液ミールは、各実験が一貫性を維持するために、12：30から15:30時間の間に37°Cのコラーゲン膜を備えた5 mLのガラス膜フィーダーを介して提供されました。
血の食事によるパン補給
PANは、上記のように人工血液食を介して蚊にプロビジョニングされました（図1A）。 D-パントテン酸ヘミカルシウム塩を、0.05、0.1、0.5、または1 g/Lの最終濃度で血液に加えましたが、コントロールはパンなしで血液を提供しました。 F1雌のサブセットは、母親と同じパン治療を受け、「補足」と呼ばれました。 F1雌の別のサブセットは補足を受けず、「補充されていない」と呼ばれていました（図1B）。すべての蚊は、2つのgon栄養サイクルを完了することが許可されていました。各生物学的複製は、の個別のコホートを使用しました A.ステファンシ。
パン補給の傾向に対する影響の評価 A.ステファンシ 血液供給に
雌の蚊は、血液食の前に水の補給を介して、または上記のように血液食を介して治療されました。 3日間のプロビジョニング期間後、水補充された蚊には、補充されていない血液食事が提供されました。最初の血液飼料では、2-Lポリプロピレン容器（グループハウジング）に収容された80〜120の雌蚊（5〜7日齢）に、人工血液の食事が提供されました。 2回目の血液食では、残っているすべての蚊（13〜15日前）に血液食が提供されました。各血液の食事に続いて、非フェムの雌を除去して定量化しました。水中のパンプロビジョニングでは、F0（GC1 = 2,181女性; GC2 = 1,689人の女性）に対して6つの生物学的複製を行い、補足F1（GC1 = 2,078人の女性、GC2 = 1,350女性）の5つの生物学的複製を行いました。女性）。 F0への血液中のパンプロビジョニングのために、GC1に対して5つの生物学的複製を実行しました（n = 2,547の女性）およびGC2の4つの生物学的複製（n = 1,337の女性）。補足F1の生物学的複製（GC1 = 1,992人の女性、GC2 = 1,132人の女性）と、補充されていないF1（GC1 = 1,462人の女性、GC2 = 856人の女性）の3つの生物学的複製を完了しました。
パンサプリメントの影響の評価に対する A.ステファンシ 産卵とクラッチのサイズ
各治療群の最大75人の血液浸透雌は、産卵後24時間後に個々の住宅（底部に2.5 mlの水を含む50 mlの円錐チューブ）に移動しました。 48時間後、女性はグループハウジングに戻されました。各チューブに卵を産んだ女性の数と各治療群についてカウントされ、記録されました。卵を産むことなくチューブで死亡した雌は、産卵の機会を得る前に死亡したかどうかを判断できなかったため、さらなる分析から除去されました。しかし、チューブで死亡して卵を産んだ女性からのデータは、さらなる分析に含まれていました。水中のパンプロビジョニングでは、F0（GC1 = 1,763女性; GC2 = 1,107の女性）の生物学的複製を6回、補足F1（GC2 = 1,460人の女性; GC2 = 895人の女性）の5つの生物学的複製を行い、4つの生物学的複製を補給F1（GC1 = 1,214）。 F0への血液中のパンプロビジョニングのために、GC1に対して5つの生物学的複製を実行しました（n= 1,640の女性）とGC2の4つの生物学的複製（n= 979人の女性）。補足F1（GC1 = 1,325の女性、GC2 = 839の女性）の4つの生物学的複製を完了し、3つの生物学的複製を補充F1（GC1 = 994の女性、GC2 = 568雌）に完了しました。
パンサプリメントの影響の評価に対する A.ステファンシ子孫の性比
産卵に続いて、F0およびF1雌によって生成された卵を、500 mLの水で5-Lナルゲン鍋に洗浄しました。これらの子孫は、両親と同じ条件下で飼育されました。飼育が始まると、20匹未満の幼虫が残るまで24時間ごとにpupを収集しました。大人の出現後、蚊は視覚的な観察によって定量化され、性別を受けました。水中でのパンプロビジョニングのために、F0（GC1 = 32,227人の子孫; GC2 = 17,179人の子孫）の6つの生物学的複製を行いました。子孫; F0への血液中のパンプロビジョニングのために、GC1で5つの生物学的複製を実行しました（n= 34,233子孫）およびGC2の4つの生物学的複製（n= 21,978子孫）。補足F1の生物学的複製（GC1 = 26,376人の子孫、GC2 = 17,079人の子孫）と、補償されていないF1の3つの生物学的複製（GC1 = 18,876子孫; GC2 = 9,689人の子孫）を完了しました。
高齢者の繁殖に対する水を介したパン補給の影響の評価 A.ステファンシ
これらの実験では、120個の雌蚊を2-Lポリプロピレン容器に収容しました。これらの蚊には、大人のエクロージョン後11、12、および13日で水を介してPANをプロビジョニングしました。 14日目に、上記のように、補充されていない血液食を提供されました。古い蚊が卵形成のために追加の時間を必要とする逸話的に発見したように、雌は産卵のために48時間後に個々の住宅に移動しました。これらの年配の女性は、産卵のために72時間許可され、その後グループ住宅に戻りました。産卵した女性の数と各チューブの卵の数を、各治療群でカウントして記録しました。の個別のコホートを使用して、3つの生物学的複製が実行されました A.ステファンシ（n= 310の女性）。
蚊の組織におけるパントステネートの定量化
全身、解剖された卵巣、残りの死体（全身から卵巣を除く）のPANレベルを評価するために、成体の雌蚊に水または血液を介してPANをプロビジョニングするか、PANを投与されませんでした（図2）。これらの女性は、他の実験で使用された蚊との一貫性を維持するために個別に収容されていました。これらの蚊によって生産された卵は、F1成体に飼育されました。 F1雌の全身は、大人の祭典後1日で収集されました。大人のeclosionの4日間で、各グループのF1雌に補充されていない血液食が提供されました。非フェスの女性は除去されました。血まみれのF1雌からの卵巣の発達は、血血後48時間の食事で残っている死体を含む収集のために解剖されました。 2つの生物学的複製が、複製あたり治療グループごとに60人のF0雌で行われました。 F1全身測定では、サンプルごとに5つの全身がプールされました（n= 180人の女性）。 F1の死体と卵巣の測定では、サンプルごとに5つの死体がプールされました（n= 90の女性）と5組の卵巣（n= 90の女性）は、サンプルごとにプールされました。
図2
PAN補充F0雌の補充されていないF1子孫におけるPANレベルの評価のためのサンプル調製。成体の女性（F0）に、汎補充水、汎補充血液、または鍋なしで提供されました。血の食事の後、卵をF1大人に飼育しました。 F1雌の全身は、大人の祭典後1日で収集されました。すべてのグループのF1雌は、成人の排泄後4日で補給されていない血液食を提供され、48時間後に卵巣を血液炎の雌の死体から分離しました
統計分析
治療グループ間の子孫の血液摂食傾向、産卵、および性比の違いは、カイ二乗検定によって分析されました。 3つ以上の治療があった場合の女性あたりの卵の平均数に対する治療の影響は、一元配置分散分析（ANOVA）を介して分析されました。ゴノトロイシックサイクル間の比較の場合、または2つの治療群がある場合、女性あたりの卵の平均数を対応して分析しました t-テスト。クラッチサイズのデータの外れ値は、堅牢な回帰と外れ値（ルート）を使用して検出され、さらなる分析から削除されました。 PANレベルは、ANOVAとTukeyのテストによって分析されました。分析は、GraphPad Prismバージョン10.3.1（GraphPad Software、ボストン、マサチューセッツ州、米国）で実行されました。
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#PantothenateはマラリアベクターAnopheles #Stephensiの給餌と繁殖を調節し補足スキームと親の栄養に依存します寄生虫とベクトル
2025-08-04 16:19:00