2.1患者と研究デザイン
この研究は、2021年7月から2022年8月までにオーストラリアの4つの病院で行われた前向きで開かれた多文字の観察研究でした。インフォームドコンセントは、登録前にすべての参加者またはその責任者から得られました。患者の人口統計（年齢、性、体重、身長、ボディマス指数（BMI）および民族）、臨床的特性（併存疾患、喫煙状態、酸素化、換気状態、抗生物質の使用、抗ウイルス使用、抗ウイルス使用、免疫調節剤、免疫調節剤、脱毛型臓器機能評価（SOFAスコア）および臨床研究所（臨床研究所）（臨床研究療法（SOFA））のアマイナゼ（SOFA）（SOFA）（SOFA）（SofA）アミノトランスフェラーゼ（ALT）、アルカリホスファターゼ（ALP）、ガンマ – グルタミルトランスフェラーゼ（GGT）、血小板数、白血球数、アルブミン、およびビリルビンおよび血清クレアチニン濃度）を患者の医療記録から収集しました。推定糸球体ろ過率（EGFR）は、慢性腎臓疾患疫学コラボレーション式（CKD-EPI）式を使用して血清クレアチニン濃度に基づいて計算されました。 [13]、重大な急性腎障害患者には適切な注意が払われています [14]。 EGFR 2の患者は、この薬物動態研究から除外されました。
Remdesivirは、1日目から10日目まで10日目から10日目まで、1日1回の60分に1回の投与量として、1日目に200 mgの負荷用量で60分間の静脈内注入として投与されました。血液サンプルは、フッ化ナトリウム/シュウ酸カリウム抗凝固剤チューブ（RemdesivirおよびGS-441524濃度を測定するため）またはカリウムEDTA（GS-441524濃度のみを測定する場合のみ）で収集しました。可能であれば、2つの別々の機会に1つの投与間隔で複数のサンプルが収集されました。除体療法の1〜3日目に行われた場合は、治療の3〜7日目の間に別の日に発生しました。サンプルは、注入の開始後、1.5、3、6、8–12、20〜24時間前の投与で収集されました。可能であれば、投与間隔中に臨床ケアのために得られたサンプルから得られたサンプルから得られたサンプルからも得られました。
RemdesivirとGS-441524を測定するためのサンプルは、室温でのレムデシビルの不安定性により、収集時にすぐに氷水浴に入れられました [15, 16]。サンプルを収集から1時間以内に遠心分離し、1〜2 mLの血漿をポリプロピレンクリオビアルに移し、後の薬物分析のために–80°Cで保存しました。 GS-441524を測定するための余剰血漿サンプル（GS-441524は室温で48時間安定しています [17]）収集から48時間以内に処理されるまで、病理学研究所に冷蔵されました。
2.2 UHPLC-MS/MSアッセイ
RemdesivirおよびGS-441524の血漿濃度は、タンデム質量分析（UHPLC-MS/MS）法と組み合わせた超高性能液体クロマトグラフィーによって決定されました。クロマトグラフィー分離は、C8 UHPLC Guard Cartridge（Phenomenex、Torrence、USA）が先行するKinetex C8、100 mm×2.1 mm（1.7μM）分析カラム（Phenomenex、Torrence、USA）で達成されました。移動相Aは、水中の0.1％ギ酸でした（v/v）、および移動相Bは、アセトニトリル（v/v）で0.1％のギ酸でした。移動相は、0.30 ml/minの流量で6分にわたって移動相Bの30〜90％の勾配として配信されました。 RemdesivirとGS-441524は、それぞれM/Z 603.20→229.05および291.95→163.15の複数反応モニタリング（MRM）で陽性モードエレクトロスプレーによって監視されました。定量化の下限（LLOQ）は、RemdesivirとGS-441524の両方で5 ng/mlでした。テストサンプルはキャリブレーターと品質管理とともにバッチでアッセイされ、結果は事前に確立されたバッチ受け入れ基準の対象となりました [18]。
2.3人口の薬物動態分析
血漿濃度を寄付する患者は、3：1のおおよその比率でモデル構築および外部検証データセットに分けられ、完全なデータ収集を伴う患者にモデル構築コホートに優先順位を付けました。非線形混合効果モデリングプログラムMonolixバージョン2021R2（Lixoft SAS、A Simulations Plus Company、Antony、France）、確率近似期待最大化（SAEM）アルゴリズムの実装が使用されました。 Remdesivirとその代謝物GS-441524の両方を含む統合モデルが開発されました。 Remdesivir（MW = 602.585）とGS-441524（MW = 291.26）の間の分子量（MW）の違いを説明するために、濃度データをng/mlからµmに変換しました。
一次除去を伴う1つ、2つのコンパートメントモデル、および3つのコンパートメントモデルは、RemdesivirおよびGS-441524の基本構造モデルとしてテストされました。投与されたレムデシビルの10％が尿中に変更されずに排泄されるため [19]、レムデシビルの腎クリアランスは、全除去除去の10％に固定されました。すべての個々のパラメーターは、ログ正規分布であると想定されていました。被験者間の変動性（BSVまたは おお）指数モデルを使用して記述されました。残留変動性を説明するために（e）、いくつかのエラーモデル（定数、比例または結合エラーモデル）がテストされました。最も適切なモデルは、次の基準に基づいて選択されました。目的関数値（OFV）（–2×log-likelihood、–2ll）、通常の適合度（GOF）プロット、およびパラメーター推定の相対標準誤差（RSE）。
2.4共変量解析
基本モデルから、生物学的妥当性を考慮して、レムセビルおよびGS-441524に対する次の共変量の効果が評価されました：年齢、性別、身長、体重、BMI、EGFR、SOFAスコア、血清アルブミン、ビリルビン、AST、ALPおよびGGTレベル。連続共変量は、線形関数と電力関数を使用してモデル化されました。
共変量モデルは、前方包含および後方排除を伴う段階的な手順を使用して構築されました。各共変量の統計的有意性は、尤度比テスト（LRT）を使用して、段階的削除中に個別に評価されました。効果が生物学的にもっともらしい場合、共変量はモデルに保持され、パラメーターのBSVが減少し、OFVが少なくとも3.84減少しました（p p
2.5モデル評価
モデルの評価は、観測と個人および集団の予測、および正規化された予測分布誤差（NPDE）と人口予測および時間のプロットを含む、適合性（GOF）プロットに基づいていました。最終モデルを使用して500のシミュレーションを使用して、視覚予測チェック（VPC）を実行しました。このプロットは、観察されたデータと比較して、シミュレートされたプロファイルの5番目、50番目、および95パーセンタイルの時間経過を示しています。
最終モデルの精度も、ブートストラップ法を使用して調べられました。 RSMLX（R Speaks ‘Monolix’、バージョン4.0.2）パッケージをRソフトウェア（バージョン4.1.3）を使用して、1000ランのブートストラップリサンプリング手順をMonolixで実行しました。各パラメーターの1000のブートストラップ実行から得られた中央値、2.5％および97.5％の値を計算し、元のデータの推定値と比較しました。
2.6外部検証
患者のサブセットからのGS-441524濃度を外部検証に使用して、最終モデルの予測性能を評価しました。モデルの相対予測誤差（PE、式1）は、母集団予測濃度を比較することにより推定されました（cpred）および対応する観察（cobs）外部検証データセットの各時点での各被験者。平均予測誤差（MPE）とルート平均平方根誤差（RMSE、式2）を計算して、予測バイアスと精度を評価しました。 Bland – Altmanプロットは、バイアスの傾向を視覚化するために開発されました。人口の薬物動態モデルは、PEの平均値と中央値の両方が20％未満の場合、有効と見なされていました。 [20]。
$$ pe = left（ frac {{c} _ { text {pred}} – {c} _ { text {obs}}}} {{c} _ { text {obs}} right） Times 100、$$
（1）
$$ rmse = sqrt { frac {1} {n} sum {（pe）}^{2}}。$$
（2）
2.7投与シミュレーション
モンテカルロシミュレーション（n = 1000）は、5日間の薬物動態モデルを使用して、最終薬物動態モデルを使用して、Simulxバージョン2021R2（Lixoft SAS、Simulations Plus Company、Antony、Antony）によって実行されました。 70歳のCovid-19の典型的な仮想患者と80 ml/min/1.73 m2のEGFR患者を使用して、RemdesivirおよびGS-441524の薬物動態プロファイルを6つの5日間のレメシビル投与レジメンでシミュレートしました。 （2）200 mgの負荷用量に続いて、1日1回150 mg。 （3）1日目に200 mgの荷重用量が続いて、12時間ごとに100 mg。 （4）100 mgの負荷用量に続いて、合計5日間で6時間ごとに50 mgが続きます。 （5）他の人が推奨するように、300 mgの負荷用量に続いて5日ごとに5日ごとに5日間5日間5日間50mgが続きます[21]; （6）1日目と2日目に200 mgの用量。すべての用量は、1時間の静脈内注入としてシミュレートされ、代替および潜在的に効果的な投与レジメンを知らせる非常に多様な投与レジメンを探索するために選択されました。 GS-441524薬物動態に対するEGFRと年齢の影響を調査するために、シミュレーションは、異なるEGFR（40、80、120 mL/min/1.73 m2）および年齢（30、70、90歳）に基づいて実行されました。これらのシミュレーションには、標準的なライセンス投与レジメンが使用されました。
Remdesivirの臨床薬力学は報告されていないため、2つの標的曝露を使用しました。これは、in vitro半最大有効濃度（EC50）を超えて、RemdesivirおよびGS-441524の90％効果濃度（EC90）を超えていません。 RemdesivirおよびGS-441524の文献から報告されたEC50またはEC90値は、補足資料表S2にまとめられています。これらの値は、タンパク質結合について修正され、レムセビルでは88％、GS-441524で2％を修正して、測定された血漿濃度のレムセビルまたはGS-441524と直接比較しました。 [22]。
2.8倫理承認
この研究プロトコルは、セントビンセント病院シドニー（2021/ETH11567）、クイーンズランド大学（2022/HE00260）、ロイヤルブリスベンアンドウィメンズ病院（HREC/2020/QRBW/66533）の人間の研究倫理委員会によって承認されました。
#Covid19の入院患者におけるRemdesivirおよびその代謝産物GS441524の人口薬物動態モデリング