Olivia Frostaug 18 2025によってHoribareviewedによるスポンサーコンテンツ
停止した流れ測定を実行するように設計された迅速な混合アクセサリーは、溶液中に発生する相互作用と反応を特徴付けるために利用されます。反応物は注射器から排出され、混合され、フローセルに注入されます。その後、流れが停止し、その後の反応/相互作用が監視されます。反応物の1つが蛍光を示す場合、この現象を利用して相互作用を追跡できます。
ただし、強度ベースの方法は、光退色に起因するものなど、検出された信号の変動によって影響を受ける可能性があります。これは蛍光寿命を利用することで避けることができますが、データ収集時間はその使用を制約しています。
繰り返しの高い繰り返し速度励起源と組み合わされた、大幅に低い死亡時間電子機器の最近の導入により、蛍光崩壊の効率的かつ迅速な測定が促進されます。そのような場合、蛍光クルクミノイド混合物の相互作用は、停止した流れの付属品を介して血清アルブミンで監視されます。 deltaflex 100 MHzでのデルタジオード励起を備えたプラットフォーム。
停止フロー – 運動速度TCSPC測定
図1に典型的な停止フローアクセサリーが概略的に示されています。反応物シリンジを手動または機械的に駆動すると、反応物が急速に混合され、フローセルに導入され、既存の液体体積を置き換えます。ストップは、注射器に入るボリュームを制限し、構成されている場合、データ収集を開始する電子信号を生成するために使用できます。
図1。 停止フローセットアップの概略図。画像クレジット：Horiba
この方法では、ミリ秒のタイムスケールで発生する混合反応を追跡できます。蛍光を含む以前の研究では、強度ベースのアプローチを利用しています。ただし、励起源の強度とサンプルの光退色の変動は、これらのタイプの測定に影響を与える可能性があります。
蛍光寿命は有益です。なぜなら、その固有の感度に加えて、それは絶対的な測定であり、定常状態の蛍光であり、相対的であるためです。さらに、寿命は、反応物の液体が混ざり合ったり、サンプルが光退色している場合、希釈の影響を受けません。
最近まで、計装はこれらのタイムスケールに関するデータを取得する効率が不足していました。ただし、繰り返し速度の励起源と相まって、大幅に低いデッドタイムエレクトロニクスの導入により、そのような測定が実行可能になりました。
DeltaflexプラットフォームとDeltaproプラットフォームの両方で利用可能な運動TCSPC測定モードにより、最大10,000個の時間分解蛍光減衰を取得でき、各ヒストグラムはわずか1 msでシームレスに収集されます。 Deltadiodeの100 MHz機能は、Deltahub（10 ns）の大幅に低いデッドタイムと最適に一致しています。短いデータ収集時間の場合、適切なデータ品質を達成するためにこのレベルの効率が必要です。
停止したフローアクセサリーは、変更されたサンプルチャンバー蓋を使用して、deltaflex（図2）の標準のキュベット（10 mmパス長）ホルダーに収まります。
図2。 「分割」サンプルチャンバーの蓋を介して入力されたフローアクセサリーを停止したデルタフェレックス。画像クレジット：Horiba
DataStation Controlソフトウェアを使用して、停止したフローアクセサリ（構成されている場合）からの外部TTL信号（設定されている場合）を介して、キネティックTCSPC測定モードのソフトウェア内で手動でデータ収集を開始できます。
クルクミノイド – 血清アルブミン結合
これらの化合物は潜在的な健康上の利点のために促進されているため、タンパク質とのクルクミノイド相互作用の検査は重要です。血液中の血清アルブミンの役割により、この相互作用を観察するのに適したモデルタンパク質になります。
この実験では、シリンジをDMSO/緩衝液中のクルクミノイドの溶液で満たし、他の反応物シリンジを緩衝液に含む反応物シリンジを含みました。この溶媒混合物では、クルクミノイドは弱い蛍光を持ち、短い蛍光寿命を示します。
タンパク質との相互作用により、蛍光量子収量と寿命の両方が増加します。光子収集を最大化するために、100 MHzの繰り返し速度が採用され、減衰あたり2ミリ秒の収集時間が利用されました。データ収集は、「バックグラウンド」を提供するためにデータゼーションで開始され、反応物が手動で排出されました。
DAS6ソフトウェアを介した分析に続いて、図3に示すように、実験の過程での平均寿命の変化がプロットされました。このプロットは、必要に応じて運動速度を計算するために使用できます。
図3。 時間とともに平均蛍光寿命の変化。励起源は、100 MHzで動作するDD -395Lで、2ミリ秒ごとに減衰ヒストグラムが収集されました。手動で動作するフローアクセサリーを停止しました。画像クレジット：Horiba
クルクミノイドの光安定性が限られているため、高強度（および繰り返し速度）励起源を持つ少量のフローセルでこれらの化合物を使用する場合、光安定性はリスクです。
蛍光寿命は影響を受け続けていませんが、強度の測定（TCSPC測定から得られた）は、時間とともに減少を示します。これは、2回目の測定（同様の設定で実施）で実証されており、10,000個の時間分解蛍光減衰曲線の取得のために減衰データ収集時間ごとに5ミリ秒を使用しています。これを図4に示します。
図4。 5ミリ秒ごとに収集されたデータを使用した停止フロー測定から得られた強度と生涯データの比較。画像クレジット：Horiba
図4は、血清アルブミンに結合するクルクミノイドに関連する初期上昇後、蛍光強度が時間とともに減少することを明確に示しています。これは光退色に起因します。ただし、蛍光寿命が安定したままであることは注目に値します。光退色の影響は、この運動プロセスを強度ベースの測定で分析する場合、明らかな意味を持ちます。
まとめ
Deltflexプラットフォームに停止したフローアクセサリーを簡単に追加することにより、ミリ秒タイムスケールで発生する運動プロセスを監視する機能が正常に実証されました。これは、効率的なデータ収集のために大幅に低いデッドタイムエレクトロニクスを組み合わせた高い繰り返し速度励起源の使用により支援された運動TCSPC測定モードで動作しました。
この研究では、結果のデータは、蛍光寿命を利用してサンプルの光退色によって影響を受けない動態を得ることの利点を明確に示しています。
Horibaについて
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#血清アルブミン結合速度の探索
2025-08-18 12:05:00