研究デザインと設定
主なコホート研究では、2023年6月から2024年8月までに、ケニアのナイロビ郡にある公共医療施設であるロードスチェストクリニックから参加者を募集しました。主要なコホート研究の包含基準は、Xpert MTB/RIFウルトラアッセイ（米国Cepeid、米国）のいずれかによってTBのベースラインスプートムテストを受けたPTB（15歳以上）の成人患者と新たに診断された、またはAFBスミア陽性に基づいていました。登録時にすでに抗TB治療を受けている患者は除外されました。このサブスタディについては、フォローアップされたXpertアッセイ陽性またはAFB陽性の患者のいずれか（n = 100）の中で、ベースラインでXpertアッセイ陽性またはMGIT培養陽性のいずれかを特別に選択する保存された連続sputサンプルを遡及的に分析しました。この研究は、sputム濃度と細菌負荷指標（AFB塗抹標本と培養）の関係を調べることを目的としたため、Xpertアッセイによって決定されるリファンピン感受性状態によって包含は制限されませんでした。 Sputum AFB Smearを介してTB陽性であることが判明したが、Xpert MTB/RIFウルトラテストを受けず、マイナスMGIT培養結果を受けた患者は分析から除外されました。
倫理的な考慮事項
研究手順とデータ
実験室の手続き
sputumサンプルは、n-アセチル-L-チェステイン（NALC）-NAOHメソッドを使用して処理されました [17]。得られたペレットは、マイコバクテリアの成長のためにBactec MGIT 960システム（Becton、Dickinson and Dickinson and Dickinson and Company、Sparks、USA）を使用して液体培地で培養し、Ziehl – Neelsen染色を使用してAFB塗抹顕微鏡検査を実施しました。陽性培養は、Capilia Tb-Neoアッセイ（Tauns Laboratories、Japan）を使用してMTBとして確認されました。
Pathfast tb lam agアッセイ
メーカーの指示に従って、LAM抽出と測定手順が実施されました [10]。生のsputumまたはnalc-naoh処理されたsputumサンプルのいずれかが主要なサンプルとして受け入れられます [10, 18]ケンリフリーザーに-30°Cで保管されていたNALC-NAOH加工されたsputumペレットを使用して、1か月から14か月の間に激怒しました。簡単に言えば、室温でsputペレットを解凍した後、サンプル200 µlに100 µlの1 N NaOHを加えました。混合物をインキュベートし（100°C、20分）、50 µLの5 m NAH2PO4で中和し、遠心分離（3000 g、5分）を中和しました。遠心分離後に得られた上清を、分析のためにLAM抽出物として収集しました。 LAM測定のために、100 µLのLAM抽出物を試薬カートリッジに移し、PathFastアナライザーに積み込みました。 LAM抽出プロセスは手動で実行され、約30分かかり、その後自動化されたLAM定量化が行われ、結果出力にさらに17分が必要でした。
統計分析
研究集団のベースライン特性は、記述統計を使用して要約されました。連続変数は、四分位範囲（IQR）の中央値値を使用して記述されました。カテゴリ変数は、周波数とパーセンテージを使用して要約されました。
Sputum LAM濃度がMGIT培養陽性およびAFB塗抹等グレードと相関するかどうかを評価するために、LAM濃度をカテゴリ全体で比較しました。 Mann -Whitney U検定を使用して2つのグループ間のLAM濃度値の中央値を比較し、複数のグループ間の比較のために、Kruskal – Wallisテストとそれに続くDunnのテストが使用されました。生存不可能な菌（培養陰性およびAFB陽性サンプルを特徴とする）のLAM濃度をさらに調べるために、細菌の負荷は、MGIT培養とAFB塗抹結果の結合結果に基づいて層別化されました。文化陰性/AFB陰性、文化陰性/AFB陽性、文化陽性/AFB陽性の3つのカテゴリが定義されました。分析は、同じ時点から得られた、Sputum LAMレベルと対応するMGIT培養またはAFB塗抹結果の間のペアデータに基づいていました。グラフィカルな表現のために、LAM濃度をベース10を使用して対数変換して分布を視覚化しました。
すべての統計テストは両面であり、統計的有意性は次のように定義されていました p
1751368596
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2025-07-01 11:04:00