著者の所属: 米国ニューヨーク州スリンガーランズ、ニューヨーク州保健局ワズワース センター (AF Payne、J. Stout、AP Dupuis II、AT Ciota)。フロリダ保健局、米国フロリダ州タンパ（P. Dumoulin、T. Locksmith、LA Heberlein、A. Rodriguez-Hilario）。フロリダ保健局、米国フロリダ州ジャクソンビル (M. ミッチェル);アルバニー大学公衆衛生大学院、レンセラー、ニューヨーク、米国 (AT Ciota)
OROV 感染症は一般に軽度の自然治癒性の発熱性疾患と関連していますが、最近の流行では致死的感染症を含むより広範な疾患が引き起こされていると考えられています。さらに、垂直感染と先天異常および胎児死亡との関連が報告されています（4、5）。
OROV の主なベクトルは クリコイデス・パラエンシス ユスリカ (6）、特に蚊も関係しています。 五角形の蚊 蚊（7）。しかし、蚊による OROV 伝播の実験的評価は限られています (8–10）。私たちは、米国の著名な蚊の種が地域の維持に貢献する可能性があるかどうかを調査しました。
私たちは、キューバの発熱患者から採取した逆転写 PCR 陽性血清から、Vero 細胞培養での増幅後に OROV を単離しました (OROV 240023)。 DSP Viral RNA Mini Kit を使用して、QIAGEN QIAcube を通じて RNA を取得しました (https://www.qiagen.com）。 NEB ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit および NEBNext Ultra II Non-Directional RNA Second Strand Synthesis Module (New England BioLabs, https://www.neb.com）。 AMPure ビーズベースの方法 (Beckman Coulter、 https://www.ベックマンコールター.com）および Illumina DNA Prep キット（Illumina、 https://www.イルミナ.com）。 BaseSpace を通じて生成された fastq ファイルを使用して、Illumina NextSeq 1000 でシーケンスを完了しました。社内パイプラインを使用してリファレンスベースのアセンブリを実現しました。高品質のリードを参照配列 (GenBank アクセッション番号 PQ064919.1、PQ064920.1、および PQ064921.1) とアライメントし、コンセンサス配列を生成しました。 Geneious Prime でペアワイズアラインメントを行った後、OROV 240023 を 1955 株 OROV TRVL9760 (GenBank アクセッション番号 KC759122–24) と比較しました (https://www.geneious.com）。 OROV 240023 は、小セグメントではヌクレオチド レベルで 6.3% の相違があり、アミノ酸レベルでは 0% であり、中セグメントではヌクレオチド レベルでの相違が 5.2% で、アミノ酸レベルで 1.8% であり、ヌクレオチドでの相違は 10.9% でした。レベル、大部分のアミノ酸レベルでは 2.0%。 69 個の固有のアミノ酸残基が中型および大型のペプチド全体に分散しています。
OROV 240023 と TRVL9760 を使用して、米国の 4 種の 6.5 log10 PFU/mL を含む血液ミールを摂食した後の蚊の能力を評価しました。 ヒトスジシマカ、 100五角形、 Ｃｘ。ピピエンス、 そして ハマダラカの四つ斑点。 ああ。ヒトスジシマカ 蚊 F46 は、2014 年にニューヨーク州サフォーク郡で収集されました。 100五角形 蚊 F57 は、2022 年にジョージア州チャトゥーガ郡で収集されました。 Ｃｘ。ピピエンス 蚊 F50 は、2022 年にニューヨーク州アルバニー郡で収集されました。 アン。方形斑点 蚊 (BEI リソース、 https://www.beiresources.org）は、1930 年にフロリダ州オーランドで最初に収集されました。感染後 14 日後に蚊に麻酔をかけ、集団あたり 26 ～ 50 匹の蚊を使用して能力を評価しました。脚を取り外し、25％のスクロースを含む毛細管に口吻を置きました。 30分後、分泌物と遺体を収集し、すべてのサンプルを-70℃で保存しました。体と足を解凍し、ステンレス鋼のビーズ（デイジー、デイジー、 https://www.daisy.com) Retsch ミキサーミルを使用 (https://www.retsch.com）、10,000×で2分間遠心分離します。 g。ベロ細胞のプラークアッセイによりサンプルを検査し、感染力（体陽性）、播種（脚陽性）、および伝播の可能性（唾液陽性）を判定しました。
我々の結果は、両方のウイルス株を持つすべての種に対する能力が一般的に欠如していることを示唆しています（表）。の感染率 ああ。ヒトスジシマカ 蚊は TRVL9760 で 2.0%、OROV 240023 で 0.0% でした。 アン。方形斑点 蚊 TRVL9760 では 4.0%、OROV 240023 では 0.0%、 Ｃｘ。 q負けた 蚊 TRVL9760 では 2.0%、OROV 240023 では 0.0%、 Ｃｘ。ピピエンス 蚊は OROV TRVL9760 で 0.0%、OROV 240023 で 2.0% でした。株に依存しますが、これらのデータは各種に対して 1 匹の陽性蚊を表しています。 TRVL9760 陽性の蚊 3 匹のうち、2 匹は播種感染を起こしており、伝染は検出されませんでした。私たちの結果は、OROV の感染力の証拠を提供します。 ハマダラカ 蚊であり、サンプルサイズが小さいことを考慮すると、この種の伝播の可能性は中程度である可能性があります。能力のより包括的な評価は、より大きなサンプルサイズで達成できる可能性があります。
OROV 240023 感染は以下に対してのみ確認されました。 Ｃｘ。ピピエンス 蚊は、唾液が陽性である唯一の蚊であり、OROV 感染を示しています。マクレガーら。 (9）同じ用量でより高いOROV TRVL9760感染レベルを示した。 100五角形 蚊ですが、伝播の可能性も同様に限定されています。さらに、デ・メンドンサら。 (10）歴史的なナマケモノ分離株である OROV BeAn19991 を使用し、感染力が欠如していることが判明しました。 100五角形 蚊。私たちのデータは、現在流行している遺伝子型がその種に感染する能力が依然として限られていることを示唆しています。これらの結果は、能力に株特有のばらつきがあることを示していますが、これらの種が北米で OROV を維持する可能性は依然として低いことを示唆しています。
ペイン博士は、ニューヨーク州保健局ワズワースセンターのアルボウイルス研究所の研究科学者兼研究所マネージャーです。彼女の主な研究対象は、蚊媒介ウイルスとベクター生物学です。
トップ
#早期リリース #オロポーチウイルスを循環させる米国の蚊種の能力の欠如 #第 #巻第 #号 #年 #月 #新興感染症ジャーナル