脂肪組織由来間葉系間質細胞に対する異なる血清の効果
Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine、2010
現在の細胞療法プロトコルには、かなりの数の間葉系間質細胞（MSC）が必要であり、これはin vitro膨張によってのみ得られます。最も重要な問題は、細胞培養に最適な成長サプリメントの選択です。理想的には、これらは動物の成分がない既知の組成であり、かなり短い期間でMSCの大規模な均質集団を生産できるようにする必要があります。この基準はこれまでに達成されていないため、MSCの分子応答を一般的に使用しているさまざまな成長サプリメントに対して評価することを目指しました。 MSCは乳房または腹部脂肪組織から分離され、4つの異なる血清のいずれかを補充したDMEMに播種しました：胎児の子牛血清（FCS）、事前テストされた胎児ふくらはぎ（FCS-SP）、ヒト同種血清（HS）または人工血清（AS）。さまざまな血清サプリメントで栽培されたMSCは、異なる形態、高脂肪生成および骨形成分化電位を示し、特徴的な抗原を発現しました。リアルタイムPCRを使用して、ASで培養された増殖MSCの両方の系統で、PPARγおよびMSX2遺伝子発現の大幅な増加を発見しました。異なる血清の存在下で培養されたMSCは、同様の全体的なプロテオーム発現パターンを持っていることがわかりましたが、同定されたタンパク質の比較により、ASで培われたMSCのほとんどの違いが明らかになりました。我々の結果は、FCSとHSの存在下で栽培されたMSCが同様の成長、分化、免疫表現型、プロテオミクスの特性を示す一方で、MSCの生理学のより深い変化を誘発するため、臨床診療への導入前にさらに基本的な研究を行うべきであることを示しています。
脂肪生成細胞へのヒト間葉系分化中の遺伝子発現とタンパク質分泌
BMC Cell Biology、2014年
背景：間葉系間質細胞（MSC）は、潜在的に人体からの組織から得られる可能性がありますが、異なるソースから精製された細胞は間違いなく異なり、医療用途ごとに最良の再生電位を持つMSCを選択する必要があります。結果：骨髄由来間葉系間質細胞（BM-MSC）、脂肪組織由来間葉系間質細胞（AT-MSC）、およびウォートン由来間葉系間質細胞（WJ-MSC）は、ヒト組織から培養され、胎児のブビン血清を補助された異なる培地で培養しました。定量的リアルタイムPCRを使用した幹細胞および脂肪細胞の遺伝マーカーの発現、およびサイトカイン、細胞外マトリックス成分、およびルミネックスとELISAを使用した成長因子の分泌を定量化しました。 3つのMSCすべてが脂肪生成細胞に分化しました。 AT-MSCは、AdipoQ、CEBPA、およびPPARG mRNA発現の最高の変化を示しました。 BM-MSCは、STEM細胞マーカーSox2およびPou5F1の高発現レベルを維持しました。 WJ-MSCは、細胞が脂肪細胞に分化するように誘導されると、mRNA発現の最低増加を示しました。タンパク質分泌に関して、WJ-MSCから生成された脂肪細胞様細胞が最高のケモカインレベルを分泌しました。 AT-MSC由来の脂肪細胞様細胞は、最低のサイトカイン量と、コラーゲンタイプIおよびIIIの最大量を分泌しました。 BM-MSCから得られた脂肪細胞様細胞は、ほとんどの血管新生因子、成長因子TGF-β1およびTGF-β2、コラーゲン型IIおよびIV、ヘパラン硫酸、ラミニン、アグレカンを分泌しました。
原発性培養におけるブタ脂肪間質血管細胞の分化に対する血清の効果
比較生化学と生理学パートA：生理学、1993年
1.追加のホルモンのない血清含有培地は、ホルモン補充の血清を含まない培地（ITTC）が、より高いGPDH特異的活性によって示されるように分化を刺激する一方で、ブタSV細胞の分化をサポートすることができませんでした。すべての血清試験で刺激された増殖をテストし、ある程度のブタSV細胞分化を阻害しました。胎児の子牛とラット血清は、子牛と豚の血清よりも抑制性が高かった。形態学、血清を含まない培地ブタSV細胞における個々の脂肪細胞に発達し、すべての血清含有培地で脂肪細胞クラスターを形成しました。血清を含まない培地中のインスリンとヒドロコルチゾンは、SV細胞分化において重要な因子であり、トランスフェリン、T3、および線維芽細胞成長因子（FGF）はそれほど重要ではありませんでした。
臍帯血からの間葉系幹細胞：分離、特性評価、および脂肪生成分化のパラメーター
Cytechnology、2012年
フルタイムの分娩からの臍帯血（UCB）からの間葉系幹細胞（MSC）の分離は、細胞の収率が低い面倒で時間のかかるプロセスです。この研究では、UCB-MSCの分離を成功させるために役立つパラメーターを特定しました。私たちの発見によると、これらの細胞の隔離の分離の可能性は、37週間以上続かなかった正常なフル期妊娠から収集されたUCBからMSCが分離された場合、より高くなります。妊娠期間に加えて、UCBの血液量と貯蔵期間も、これらの細胞の分離が成功するために考慮されるべきです。ここでは、収集された理想的な血液量は80 mLを超え、貯蔵期間は6時間を超えてはならないことがわかりました。形態学的、免疫表現型、タンパク質/遺伝子発現、および脂肪生成分化の可能性により、UCB-MSCを特徴付けました。分離されたUCB-MSCは、線維芽細胞のような形態と脂肪細胞様細胞に分化する能力を示しました。 UCB-MSCの未分化状態のマーカーを探して、分化プロセスの異なる期間に沿って脂肪細胞様細胞に沿ってUCB-MSCのタンパク質発現プロファイルを分析しました。私たちの結果
酵素治療なしの脂肪由来間質細胞の分離：拡大、表現型および機能的特性評価
幹細胞と開発、2014年
幹細胞療法は、多くの疾患の治療のための潜在的な方法です。最も頻繁な細胞源は、骨髄由来間葉系間質細胞（BM-MSC）です。ヒト脂肪由来間質細胞（ADSC）は、造血をサポートし、進行中の免疫応答を調節し、中胚葉起源の細胞に分化するため、BM-MSCと同様の特性を共有します。一方、ADSCの頻度は高い頻度で、可用性が高く、BM-MSCと比較して倫理的な問題はほとんどなく、臨床使用のためにBM-MSCよりも利点があります。 ADSCを分離するために使用される方法のほとんどには、コラゲナーゼ消化ステップが含まれていますが、コラゲナーゼのタイプとサンプル消化の時間は研究間で異なり、これらの違いは細胞特性に影響を与える可能性があり、したがって結果の比較に影響します。この障害を克服するために、コラゲナーゼの消化ステップなしでリポアスピレートからADSCを分離する新しい方法を提案します。コラゲナーゼ消化を使用して、得られたメソッドと古典的なプロトコルで得られたADSCを比較しました。私たちの方法で得られた細胞は同等ですが、古典的な方法で得られた細胞よりも長期的な造血サポートがあります。さらに、私たちの方法は、より簡単、より安全で、より速く、安価であり、多くのADSCを得るための優れた製造慣行とより一致しているため、古典的な方法よりも利点があります。
外植片培養：ヒト脂肪組織およびリポアスピラートからの間葉系間質細胞を分離するためのシンプルで再現性があり、効率的かつ経済的技術
Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine、2012
脂肪組織は、その簡単なアクセシビリティとMSC含有量が高いため、間葉系幹/間質細胞（MSC）の好ましい供給源として浮上しています。脂肪組織由来間質細胞（ASC）の従来の分離方法には、酵素消化と遠心分離が含まれます。これは、費用と時間のかかるプロセスです。分離中の機械的ストレス、細菌由来の製品の使用、およびエンドトキシンおよび異種抗原による潜在的な汚染は、この方法の他の欠点です。この研究では、ASCをヒト脂肪組織から分離するためのシンプルで効率的なプロセスとして、外植片培養を提案します。この手法は、脂肪吸引および外科的切除によって得られた脂肪組織からASCを再現性に隔離するために使用でき、植生細胞が汚染されていない濃縮されたASC集団を生成します。脂肪組織の外植物は、酵素消化によって得られたものと比較して、最初の脂肪組織のグラムあたりP0でASCの大幅に高い収率をもたらすことを示しています。外植片培養によって分離されたASCは、酵素消化によって得られたものと表現型的および機能的に同等であることを実証します。さらに、外植林由来のASCは、免疫特権状態とMSCに暗黙の免疫抑制特性を共有しており、同種の臨床環境でテストおよび適用される能力があることを示唆しています。外植片培養はシンプルで安価で穏やかな方法であるため、特に出発物質が限られている場合、組織工学および再生医療用の脂肪組織由来の幹/間質細胞を得るための酵素技術よりも好まれるかもしれません。
#PDF脳血球誘導体間間間質細胞の脂肪生成障害能の分子基盤