細胞外マトリックスタンパク質でコーティングされたマルチウェルプレートで、誘導された神経前駆細胞、またはINPCSの培養を採用します。
培地をグリア誘導媒体に置き換えてインキュベートします。媒体中の成長因子とホルモンは、グリア前駆細胞へのINPCの分化を促進します。
細胞の増殖のために、1日おきにメディアを変更します。次に、メディアを星状細胞媒体に置き換えてインキュベートします。
媒体中の特定の栄養素と成長因子は、グリアの前駆細胞の分化を星状細胞に駆動します。
メディアは1日おきに変化し、星状細胞の成熟を促進します。
細胞が約70％コンフルエントである場合、培地をニューロディフメディウムに変更し、3週間、1日おきに培地を変化させ続けます。分化中に細胞を分割しないでください。 3週間後、細胞はニューロンマーカーTUJ1を発現する必要があります。
より成熟したニューロンとニューロンのサブタイプを得るには、最大3か月まで分化を継続します。特にグリア系統に向けてINPCを分化させるには、培地をグリア誘導培地に変化させます。これには、表皮成長因子のミリリットルあたり20ナノグラムを含み、グリア前駆細胞に分化を誘導します。媒体の半分を取り除き、約2週間、1日おきに新鮮な媒体と交換します。
この期間中、100％のコンフルエンシーに達すると、10ミクロモルRhoキナーゼ阻害剤の存在下で細胞を1対3で分割する必要があります。 2週間後、細胞がほぼ合成されたときに培地を市販の星状細胞培地に変更し、2日ごとに培地を変化させ続けることにより、細胞を星状細胞にさらに区別します。約7日後、細胞は星状細胞マーカーを発現し始めます。
#ビデオ誘導された神経前駆細胞を伴う誘導神経進行体細胞を星状細胞に区別する