研究参加者
この後ろ向き研究には、2020年1月から2022年12月までに岳北人民病院でHPVウイルス量の検査で陽性となった52人の女性が含まれていた。 岳北人民病院の倫理委員会はこの研究にゴーサインを出し、ヘルシンキ宣言とそれに関連する規則や規制に従って行われた。 すべての患者は検査前に書面によるインフォームドコンセントフォームに署名した。 遡及研究として、患者の臨床データは病院の HIS システムから取得されました。 データ収集プロセスは機密であり、患者の機密情報は収集と分析のプロセス中に匿名化され、患者に対する費用や追加のリスクはありませんでした。
包含基準は、(1) HPV DNA52 陽性患者 (2) 患者が同じ期間に TCT 結果を有していることである。 除外基準は、(1) 高リスク HPV16 および/または HPV 18 同時感染患者。 (2) 不完全な情報。
2020年から2022年にかけて、岳北人民病院でHPV定量検査を受けた女性患者計1882人が陽性反応を示し、そのうち533人がHPV52陽性反応を示した。 HPV16/18と検査結果が同時陽性となった40人の患者を除外し、HPV52ウイルス量を計算できなかった5人の患者を除外した。 最終的に、合計 488 人の患者が参加しました（図 1）。 1）。
この研究の参加者をスクリーニングするフローチャート
データの収集とグループ化
患者の年齢、HPV52 ウイルス量、他の種類のウイルス量 (このデータがなければ単一の感染症である) などの臨床データ、および同時の TCT 結果は、岳北人民病院の HIS システムを通じて臨床記録から取得されました。
HPV ジェノタイピングとウイルス量
岳北人民病院が適用した HPV ジェノタイピング検査キットは、21 HPV ジェノタイピング キット (Shuoshi Biotechnology, Ltd.、中国、江蘇省) によって提供されました。この検査キットは国家医薬品局によって承認されました (NMPA、第 20153400364 号)。 このキットは多重蛍光 PCR 定量技術を採用しており、13 HR-HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59 を含む、試験検体中の 21 の HPV 遺伝子型を迅速かつ正確に識別できます。 、68、中リスクHPV26、53、66、73、82、および低リスクHPV6、11、81の3つを分析し、標準化された方法で21のHPVサブタイプのウイルス量も同時に定量します。
このキットは、検出に PCR プライマーと対応する TaqMan プローブ (5′ レポーター グループと 3′ クエンチャー グループを備えたオリゴヌクレオチド) を使用して、ヒト パピローマ ウイルス ゲノムの L1 領域をターゲットにし、FAM、HEX、ROX でそれぞれのサブタイプをマークし、実行します。各サンプルに対して同時に 8 つの反応を実行します。 反応 A、B、C、D、E、F および G の調製物は、21 種類の HPV 遺伝子型の同時検出と識別に使用されます。 反応 H では、DNA トポイソメラーゼ III をコードする単一コピー遺伝子 TOP3 が対照として増幅され、所定のサンプル中のウイルスのコピー数が決定されます。 アッセイの感度は 20 コピー/反応です。
キットの要件に従ってサンプル DNA をサンプリングして抽出します。 総反応量は、DNA サンプル 2 μL、核酸増幅反応液 10 μL、反応液（特異的プライマーおよびプローブを含む）8 μL の合計 20 μL とします。 すべての成分を混合した後、反応チューブを増幅検出のために蛍光 PCR 増幅器に置きます。 反応条件は以下の通りである:UNG酵素処理は50℃で5分間、前変性は95℃で10分間、変性は94℃で10秒間、アニーリング、伸長および蛍光検出は58℃で40秒間であった。 、45 回サイクル、4 ℃ で保管。
最後に、HPV サブタイプ プローブ蛍光マーカー表に従ってサブタイプを分析しました。 得られたCT値をHPV核酸タイピング定量解析ソフトウェアv1.0（Shuoshi Biotechnology, Ltd.、中国、江蘇省）に代入して形質転換した。 絶対定量は主に、HPV および細胞対数期の 5 点標準曲線を確立することによって実行されました。 標準曲線は Y = -3.34656 (log10X) + 38.51644 でした。 変換されたウイルス負荷単位は細胞数（個）でした。
ThinPrep細胞診検査(TCT)
子宮頸部 ThinPrep 細胞診検査は、病理検査室の上級専門家 2 名によって解釈されました。 TCT の診断結果は、国際がん協会 (2014) による Bethesda システムに従って分類されました。結果は、上皮内病変または悪性腫瘍陰性 (NILM)、重要性不明の異型扁平上皮細胞 (ASCUS)、非定型の 5 つのクラスに分類されました。扁平上皮細胞 – 高悪性度扁平上皮内病変 (ASC-H)、低悪性度扁平上皮内病変 (LSIL)、高悪性度扁平上皮内病変 (HSIL)、および扁平上皮癌 (SCC) を除外できません。 ASC-H が 6 件、HSIL が 5 件、SCC が 1 件あります。 症例数が少なすぎて、これらの結果は膣鏡生検の次のステップで参照する必要があるため、それらを HSIL の TCT 結果に統合しました。 HPV52 ウイルス量と TCT の関係をさらに検証するために、比較のために 4 つのカテゴリーを 2 つのグループに分けました。 ASCUS の特異性を考慮すると、それは良性病変を示している可能性もあれば、活発な増殖に関連する潜在的な悪性変化を示している可能性もあります。 そこで、TCT サブグループをグループ化して、次のグループに階層化しました。1 つは ASCUS 以上の TCT 結果、もう 1 つは ASCUS 以上の TCT 結果です。 もう 1 つは、TCT の結果が LSIL 以上である場合です。
統計分析
データ処理と統計分析には、SPSS 24.0 (IBM、ニューヨーク州アーモンク) および R 言語ソフトウェアを使用しました。 TCT の結果は、研究対象集団を説明するためのグループ化変数として使用されました。 年齢および対数変換処理した HPV52 ウイルス量は正規分布連続変数であり、定量的データは平均 ± 標準偏差として表されました。 HPV 感染の種類はカテゴリ変数であり、パーセンテージとして表されました。 グループ間の差異は、ANOVA およびクラスカル ウォリス順位和検定を使用して評価されました。 p 値 < 0.05 は統計的に有意であるとみなされます。
HPV52 ウイルス量データは参加者間で偏った分布を示したので、対数変換によって HPV52 ウイルス量を処理しました。 データ分析の結果は 3 つのモデルに分割されました。モデル 1 (共変量は調整されていません)。 モデル 2 (年齢調整済み); モデル 3 (年齢と感染の種類を調整)。 信頼区間 (CI、95%) とオッズ比 (OR) を使用して、モデルに含まれる調整済み共変量をスクリーニングしましたが、p 値の単変量分析では同じ結果が得られませんでした。 一般化された加算モデルを使用して、すべての共変量を調整し、非線形関係を評価し、滑らかな曲線をプロットしました。 非線形性が存在する場合、再帰的アルゴリズムを使用して変曲点を決定しました。 次に、変曲点の両側に基づいてセグメント化された線形モデルが構築されました。 対数尤度比検定の p 値を使用して、最適モデルを構築しました。 p 値が ≤ 0.05 の場合、ウイルス量と TCT の相関は非線形であり、それ以外の場合は線形でした。 単一の感染曲線では、2 つの変曲点 K1 (8.95) が得られました。 K2 (11.35) (表 5）。 多重感染曲線には、変曲点 K3 (12.095) が 1 つだけあります (表 6）。 複数の感染症には、（16/18 歳以外の）高リスク HPV 型と低リスク HPV 型の両方が含まれます。
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2024-04-23 09:53:23
